흑염소와 약용식물 복합 증탕추출액 및 증류액이 조골세포 증식과 파골세포 형성에 미치는 영향 논문 및 파1처음부 (2018/10/18)

Journal of Nutrition and Health(J Nutr Health)2015;48(2):157~166 http://dx.doi.org/10.4163/jnh.2015.48.2.157 pISSN 2288-3886/eISSN 2288-3959​ Research Article​ 흑염소와 약용 식물 복합 준 추출액과 증류액이 구조 뼈 세포 증식과 파 고루 세포 형성에 미치는 영향*​ 송효남 1†다 캉효은 2·권인숙 3세 대학 한방 바이오 융합 과학부 1세 대학 한의대, 2안동 대학 식품 영양학과 3​ Effect of water extract and distillate from the mixture of black goat meat and medicinal herb on osteoblast proliferation and osteoclast formation*​ Song, Hyo-Nam1†·Leem, Kang-Hyun2·Kwun, In-Sook3​ 1 School of Integrated Oriental Medical Bioscience, Semyung University, Chungbuk 390-711, Korea 2 College of Korean Medicine, Semyung University, Chungbuk 390-711, Korea 3 Department of Food Science and Nutrition, Andong National University, Gyeongbuk 760-749, Korea​ ​ ABSTRACT​ Purpose:The effects of water extract and distillate from the mixture of black goat meat and medicinal herb on MG-63 osteoblast proliferation and mouse bone marrow derived osteoclast formation were investigated.Methods:P roximate composition, volatile basic nitrogen(VBN), mineral content무료 amino acid composition and무료 fatty acid composition in black goat meat were determined.Water extract and distillate were prepared with three groups;goat meat only(BG-E, BGD), six herbs added group(BG-E6, BG-D6), and eight herbs added group(BG-E8, BG-D8). Osteoblast proliferation, mineralization and calcium uptake activity of MG-63 cells were measured and tartrate resistant acid phosphatase activity of osteoclasts was analyzed.Results:Black goat meat had remarkably low fat and high level of calcium.Glutamic acid was the most abundant amino acid.Herbs added extract groups(BG-E6 and BG-E8)showed increased MG-63 cell proliferation in a concentration dependent manner, while all the distillates did not show the effect.All extracts and distillates showed significantly increased osteoblast mineralization depending on the concentration.In particular, herb added extract, BG-E6, increased 170.3%of control and the distillate of BG-D and BG-D6 increased up to 168.5%and 159.8%, respectively.Calcium uptake activities of all water extracts showed remarkable increase of BG-E6 and BG-E8 up to 615.5%and 628.1%of control, respectively.Ditillates had no effect except BG-D6.All water extracts significantly reduced the activity of tartrate-resistant acid phosphatase(TRAP)in osteoclasts derived from mouse bone marrow.Conclusion:Combination of black goat meat and medicinal herb increased the MG-63 cell proliferation and effectively inhibited osteoclast differentiation in both water extracts and distillate of them, which implies that they could be used as potent functional food materials for bone health. ​ KEY WORDS:black goat meat, medicinal herb, MG-63 cell, osteoblast, osteoclast​-----------------------------------------------------Received:January 29,2015/Revised:February 13,2015/Accepted:March 17,2015*This work was supported by the research grant from Semyung University in 2013. † To whomcorrespondence should be addressed.tel:+82-43-649-1430, e-mail:hnsong@semyung.ac.kr©2015 The Korean Nutrition Society This is an Open Access article distributed under the terms of the Creative Commons Attribution Non-Commercial License(http://creativecommons.org/licenses/by-nc/3.0/)which permits unrestricted non-commercial use, distribution, and reproduction in any medium, provided the original work is properly cited. --------------------------------------------------------------------------------------한국 정부에서의 흑염소 사육 바람은 삼한시대 이야기 무렵까지 거슬러 올라가, 옛날부터 이이다 산모의 보약으로 널리 알려져 왔다. 한방에서는 염소고기는 온양성 식품으로 특히 노인의 차가운 몸을 따뜻하게 해주는 식품으로 분류되며, 본 초강목에는 몸을 유지하여 허약을 다스리고 피로와 추위를 물리쳐 위장작용을 보호하며 마음을 편안하게 하는 식품으로 기록되어 있다. 1특히 흑염소는 지방 함량이 적고 단백질과 칼슘과 철분이 많아 이다상브만 아니라, 회복기 환자, 허약 체질의 사람이나 아이들과 좋은 식품으로 알려졌으며 역시한 근육 섬유가 연해서 소화 흡수율이 다 높고 비타민 E가 많다. 1​, 흑염소는 고기 자체와 쥬은탄카콤품잉 추출액의 형태로 소비되지만 우리 정부, 흑염소의 80퍼센트 이상이 이른바 게소쥬가에 1골 오지는 아내가 다가오고 공 모양의 수동 기계식 쥬은탄카콤 방식에 의한 준 추출액에서 유통되어 왔다. 1993년인 식품 회사가 흑염소 즙을 고온 이중 살균 처리한 파우치의 형태로 대량 생산한 것을 계기로 1996년부터 축협 11개 지상개로 흑염소 즙 제조 사업을 시작한 이래 현재까지 축협 농협 영농 조합 및 관련 농장 등이 염소의 추출물 가공품의 시장을 점유하고 있다. 2,3​ 그러나 이와 함께 공연히 비싼 건강 식품으로서 유통되고 있는 쿠로 야기쥬은탄카콤품의 품질이나 효능에 대해서 학계에서의 훙미웅 매주 저조한 편이었다 흑염소 관련 선행 조사는 가축으로 사육과 경제성에 대한 분야에 치우치고 있는데, 예를 들면, 급여하다 사료의 종류가 흑염소의 발육과 육질이 어떻게 영향을 미칠지 4,5는 흑염소의 거세 시기나 방목의 모양이 경제성과 육질에 어떤 영향을 미 하는지 6,7등에 초점을 맞추고 있어 식품 분야에서 체계적인 조사는 매우 미흡한 실정이었다 식품과 관련된 흑염소의 선행 조사에서는 훅욤소육의 영양 성분 분석, 8-10, 흑 야기육골엑 제조, 11,12, 흑염소 고기 조리법 13이나 염소의 추출액의 품질 지표 도출에 관한 조사 1과 같은 기본적 특 성에 결과가 보고되고 있을 정도였다 ​ 한편 크로야기우오은료육에 각종 한약재 등을 애처 소리 가과 열탕에 1정규 시간 추출한 준 추출액은 특유의 누린 맛과 저항감 있는 매운 제게 기호성이 떨어지기 때문에 약으로 인식하고 식사한 성인들과 달리 성장기 어린이의 복용은 매우 드문 편이었다 1이런 점을 보완하기 위해서 최근 개발된 증류식 추출물은 맛과 향미가 개선되고 식사하기 쉬운, 소화와 흡수가 빠른지 준 귤 나무 추출액에 비해서 효능 면에서 아직 논란이 많은 가공 법이었다 증탕 추출액이 가지고 있는 유효성분이 휘발성일 경우, 동일한 효과를 기대할 수 있는 제한이 있기 때문이었다. 그러나 이 같은 공정차에 따른 효능평가 선행조사도 전무한 상태였다. 골조직은 콜라겐, 당단백과 같은 세포외 기질(extracellular substance) 외 골세포, 골형성에 관여하는 조골세포(osteoblast) 및 골흡수에 관여하는 비골세포(osteoclast) 등 다양한 종류의 세포로 구성되어 있다. 파골세포에 의한 뼈 흡수와 조골세포를 통한 새로운 골기질 형성 및 무기질화 과정의 반복으로 뼈 거의 매일성이 유지된다. 정상적인 경우 조골세포의 활동을 통한 뼈 형성이 파골세포의 활동을 통한 뼈 흡수보다 많다. 20그러나 30~45세 앞으로는 점수 골 흡수가 뼈 형성을 능가하게 됐고 과도한 골 소실은 골다공증을 유발하기도 한다. 즉, 골다공증(osteoporosis)은 뼈 형성(bone formation)과 골 흡수(bone resorption)의 불균형에 의한 단위 용적 내의 골량(bone quantity)가 감소하면서 쉽게 골절을 1우키는 질환인 것이었다 21​ 이런 불균형의 원인은 골 흡수 작용을 하파골 세포 활성도는 증가하고 골 형성에 관여하는 조골 세포의 활 성도가 감소하기 때문이다, 그러므로, 뼈 엉성증 치료에 있을 수(골 세포 분화를 억제하거나 조골 세포의 활성을 증가 가시 나는 매우 중요한 포인트가 된다. 22 2011년 질병 관리 본부의 국민 건강 영양 조사 결과 발표에 따르면 50세 이상의 골다공증의 유병율은 모두 인구의 22.5%, 남성이 7.5%, 여자가 37.5%가 되고 있고, 특히 여성이 남성보다 5배 높은 유병률을 보였다. 23​ 한편 아이 같은 성장기에는 체중, 키, 뼈, 치아, 뇌 등이 급속히 발달되는 중요한 시기로 뼈의 경우 성장하는 동시에 뼈가 단단해지화골 현상이 이어진다. 어린이와 어린이 뼈의 건강과 성장을 위해 마시기 좋은 성장솔리료형의 제품이 이미 시판되고 있는데 홍삼, 폴리칸, 유산칼슘, CPP(case in phosphopeptide) 등의 성분이 함유되어 있다. 11​ 요즘에는 약용 식물에서 골의 강화를 위한 소재의 발굴에 많은 훙미이 모였으며, 100여편 이상의 조사가 이루어지고 이 중 식품 원료로 이용되는 한약 중, 갈근의 경우 phytoestrogen중 하나 daidzein이 상당량 포함되어 있으며, 고용량 투여 시 골다공증에 대한 효과가 있을 것으로 보고됐다. 14이외에도 오미자, 15건 지환, 16우슬, 17녹용 18,19등 다수의 한약에 대한 분석이 한창이다. 본 조사에서는 뼈 강화가 본격적으로 필요한 성인과 성장기 어린이를 위한 골기능개선용 흑염소 액상 제품을 개발하기 위한 기초조사로 흑염소 원료육과 뼈 건강에 유용한 한약재 복합물을 수동기계식 증탕가공방식과 증류식 추출기계를 통한 증류가공방식으로 제조하였다. 검정 야기우오은료육에 대한 기초적인 영양 성분을 분석하며 골의 강화 효능 평가를 위한 MG-63구조 뼈 세포를 이용한 쵸골세 포의 생장 촉진 활성과 골수 세포 유래 파골 세포 분 화옥지에후와루송을 비교 분석함으로써 흑염소와 천연 약용 식물에서 뼈 대사에 관련하는 세포의 분화와 기능을 조절할 수 있는 기능성 소재를 개발하려 했다. ​ 조사의 비결 ​, 검정 야기우오은료육의 전처리 ​ 훅욤소육의 부위별의 영양 성분을 분석하기 위해서 약용우에 사용되는 흑염소(반도체 중량 15 kg)3마리를 사서에 들은 도축장에서 도축한 뒤 원화 료육에서 식용하지 않거나 저장 중 변질을 1우키는 원인이 되고 사용하지 않는 모퉁이의 각질, 내장 부위와 너의 휘어진 공시 재료부터 제거했다. 절 단 부위를 처리한 원 료육은 한약재와 물과 접촉 면적을 넓히고 추출기 내의 효율적인 공간 확보를 위해서 반도체를 2분 체로 절단한 후 바루 골, 다시 다리 고기의 부위, 목살의 부위나 배 부분의 주요 세 부위로 분할했다. 영양 성분 분석을 하기 때문에 바루 골도에은 고기 각 부위를 200~400 g씩 취해서 망육 경계 망육하고 균질화한 후 별도의 저장 없이 분석실의 시험을 수행했다. ​, 검정 야기우오은료육의 영양 성분 분석 ​ 1반 성분 ​ 1반의 성분은 AOAC의 비결 24에 준하여 분석했다. 수분하기 양은 105o C가압 건조 법, 조회 분 함량은 550o C로 직접회의 화법으로 분석했다. 조단백질 함량은 micro-Kjeldahl법을 이용한 단백질 자동분석장치(Kjeltec protein analyzer, Tecator Co., Hoeganaes, Sweden)에서 조지방 함량은 Soxhlet법을 이용하여 분석했다. 식이섬유의 함량은 효소중량법으로 분석하고, 총당질 함량은 공제법으로 계산했다. 휘발성 염기질소 휘발성 염기질소(VBN, Volatile Basic Nitrogen)의 함량은 식품 전문을 통해 Conway unit을 이용하는 microdiffusion method로 측정하였다. 25​, 무기질 함량 ​ 주요 5종의 무기질(Na, Ca, K, P, Fe)함량을 식품 위생 중 ICP-AES법에 의거 측정했다. 26즉, 시료 약 3 g을 항량이 된 도가니에 정확히 취해서 전열기 위에서 예비 탄화된 뒤 550o C후에화로에서 백색은 회백색이 될 때까지 회화시켰다. 실온으로 냉각된 후 남아 있는 회백색의 재로 증류 수 10방울 정도를 떨어뜨리고 날아가지 않도록 한 앞으로 얇게 질 산(질산:증류수=1:1, v/v)3 mL를 넣어 열판에서 카욜하 여자 초산을 완전히 곰 귀 붙였다. 이를 550o C전기 그림으로서부터 1시간 동안 대화한 향후 방 식다시 도가니에 묽은 염산(염산:증류수=1:1, v/v)10 mL을 천천히 케요 재를 녹인 뒤 고속 액체 크로마토 토그레피용 증류수를 이 사용하여 50 mL에 정 용항 앞으로 무후에붕 여과지로 여과하고 시험 액체로 했다. 분석은 ICP-AES(Activa, HORIBA Jobin-Yvon, Longjumeau, France)을 사용하고 있으며 RF power 1,000 W, nebulizer gas flow 0.7~0.8 L/min, plasma gas flow 12 L/min, sheath gas flow 0.2 L/min및 pump speed 20 rates/min의 조건으로 분석했다. ​ 지방산 조성 ​ 지방산 조성은 Folch등 27의 비결로 지질을 추출 정제한 뒤 14%BF3-methanol에 methyl ester화되고 Gas Chromatography(HP-6890GC FID, Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA)로 분석했다. GC분석 시 HP-FFAP column(30m× 0.32µ m ID, 0.52 mm film thickness, Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA)을 사용하고 injector 230o C, detector 50o C, column oven 100o C(2 min)~4o C/min~230o C(20 min)과 carrier gas이었다 He을 1.5 mL/min, split ratio 10:1의 조건으로 흘리며 주와, 불꽃 이온화 검출기(FID)로 분석했다. 28​ 유리 아미노산 조성 ​ 단백질을 강산으로 가수 분해하여 생성된다 유리아 미노를 ion exchange를 통해서 분리하고 ninhydrin post column유도체를 형성시킨 뒤 발색시키고 visible detector에 붕속하은 원리를 이용하여 아미노산 조성을 분석했다. 29즉 시 량약 10 g을 정확히 칭량해서 ampule에 넣은 후 6 N HCl 15 mL을 가한 향후 3분간 진탕 했다. 질소 가스에서 30초간 치환하고 밀봉한 후, 질소 가스가 충전된 상태에서 105o C heating block에 장착시킨 뒤 24시간 동안 가수 분해했다. 분해가 끝난 시료를 실온에서 방 식어 50 mL정적 flask에 시료 용액을 완전히 이동, 다소리는 뒤 증류수에서 정 연화 약 1차 중화시켰다. 용액을 여과지(Whatman 5)로 여과하고 test tube에 10 mL정도 여액을 모은 뒤 2 mL를 취하고 25 mL정적 flask에 3회 증류수에서 정 연화 약 2차 중화했다. 이를 0.45µ m PTFE filter(Millipore Co.Billerica, MA, USA)로 여과한 후 시험 용액으로 아미노산 자동 분석기(Hitachi AAA L-8900, Hitachi High-Technologies Co.Tokyo, 재팬)에 분석했다. 아미노산욕물질은 amino acid standard H (Pierce Co., Rockford, IL, U.S.A.)를 사용하고 분석조건은 ion exchange column(4.6×60 mm, packed with Hitachi custom ion exchange resin), column flow 1.0 mL/min, injection volume 20µ L, wavelength 570 nm및 440 nm(for proline)이라고 분석했다. 흑염소와 약용식물 복합증탕추출액 및 증류액의 제조한의학문헌과 전문가의 자문을 인적증거로 하여 골강화 효과가 있는 약용식물 중에서 현행 식품위생법의 식품공전상에 식품 주부원료로 사용할 수 있는 후보원료를 선발하였다. 조골 세포 생장 촉진 활성에 관한 예비 세포 조사과 11, 복용량을 고려하여 두 종류의 복합 배합비를 체결한 뒤 각 각의 준 추출액과 증류액을 제조했다. 즉, 훅욤소육과 황기, 홍 후아 씨, 당귀, 황정, 속단, 이노 코즈치(2/2/2/2/1/1)등 6가지다 약 복합 배합과 동 1의 조합에 녹용과 녹각(0.3/1.2)2종을 추가한 8종의 복합 배합비를 개발했다. 한마리 분의 훅욤소육과 배합된 모든 한약을 면으로 만든 주 머니에 다소 리어 30 L이 대형 전탕 용기에 넣고 물 20 L을 가수한 뒤 121o C에서 7시간 쵸은탄하요고 준 추출액(이하 BG-E, BG-E6, BG-E8)을 만들었고, 정 탄 용기로 방 츄루도에는 증기를 포집, 후에오느고 증류액(이하 BG-D, BGD6, BG-D8)을 제조한(Fig.1).

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​ 구조 뼈 세포 배양 ​ MG-63(human osteoblastic cell line)구조 뼈 세포는 한정 세포 은행에서 구입하고 Dulbecco's modification of Eagle's medium(DMEM, GIBCO BRL, Grand Island, NY)에 한 0%FBS(Gibco BRL, Grand Island, NY)에서 배양했다. 세포는 37o C, 5%co2환경에서 베양하욧 세포가 충분한 증식이 일어나3~4일 간격으로 계대 배양했다.​ 구조 뼈 세포 생장 촉진 활성 ​ 96 well plate에 한 00µ L/well로 24시간 배양한 세포에 BrdU labeling solution을 well당 한 0µ L씩 넣어 시료를 처음으로 덧붙였다. 각 추출액의 원액을 기준으로 일/일 0, 일/80및 일/640의 희석액을 만들어 처리했다. 약 한 5시간 후 labeling media를 털어낸 후 well당 FixDenat을 200µ L씩 넣었다. 30분 후 FixDenat를 제거 anti-BrdU-POD working solution을 한 00µ L/well을 처리하고 90분 후 이 용액을 내 맛있었다. Washing solution에 3회 씻은 다음 다시 기질 용액을 well당 한 00µ L씩 넣어 각 well에 25µ L의 것 M H2SO4를 넣고 ELISA reader에서 450 nm에서 흡수도를 측정했다. 30​ 골 석회화 촉진 활성 ​ 배양한 MG-63세포의 석회화 유도를 위한 osteogenic media(α MEM+일 0%FBS+50 mg/L ascorbic acid+일 0 mMβ-glycerophosphate)에서 시료를 첨가하여 2일 일간선 씼다. 세탁한 세포를 한 N HCL용액에 일 5분 침지하고 hydroxy apatite를 추출하고 칼슘을 정량하고 대조군과 비 교하욨다. 칼슘 측정 kit는 QuantiChrom Calcium Assay Kit(DICA-500, BioAssay Systems, Hayward, CA, USA)을 사용하고 6일 2 nm에서 측정했다. 3일 ​ Calcium uptake활성 ​ Mouse의 골수에서 추출한 primary cell에 각 시료를 처리하고 Premo Cameleon Calcium Sensor(Invitrogen Ltd.Paisley, UK)을 사용하고 순간적인 calcium uptake을 측정했다. 사전에 칼슘 센서를 제조사의 프로토콜에 의해서 전처 리한 세포에 각 시료를 처리한 후 60초 후에 fluorescence resonance energy transfer(FRET)방식으로 유도된 파장의 청천 루루 측정하기 위한 ELISA reader를 이용하고 405 nm파장에서 excitation, 2개의 파장(YFP emission 535 nm과 CFP emission 485 nm)fluorescence치를 츄크쵸은하이었다. 32​ 골수 세포 분리 및 파 고루 세포 분화 ​ 6주 나이 SD-Rat의 골수에서 primary cell을 수집하고 DMEM(with것 0%FBS)에 3시간 배양했다. 미부착 부유 세포만을 취하고 24 well plate에 동분서주하고 3일 간의 안정화 시켰다. 각 시료는 원액을 최종적으로 농도 한 0μ L/mL이 된 도록, 종산 군을 제외한 모든 군에는 TNF-α을 한 0 ng/mL씩 처리해 파골 세포 분화를 유도했다. 각 배지는 2일마다 교체되고 교체 시마다 TNF-α 및 시료를 동일하게 반복 처리했다. 33​ 파고 세포 TRAP(tartrate resistant acid phosphatase)활성 ​ 파고 세포의 분화 정도를 Hotokezaka등 34의 방법을 수정하고 TRAP의 활성이 확인했다. 96-well에 5×일 04 cells/well 이렇게 cell을 접종하고 분화인제와 시료를 처리하고 7일간 배양했다. 고정된 cell에 기질로서 일 5 mM 4-nitrophenyl phosphate in것 00 mM Sodium acetate용액과 일 00 mM Sodium Tartrate in것 00 mM Sodium acetate용액의 영혼 하프엑에 37o C에서 30분 동안 반응시켰다. 반응 후 효소 반응 액을 0. 것 N NaOH반응을 중단시키고 405 nm에서 흡수도를 측정하고 TRAP의 활성으로 표시한 ​ 통계 분석 ​ 모든 점검은 3회 이상 수행하고 평균±그대로 편차로 표시했다. 결과 사이의 통계적 유의성은 공분산 분석(ANOVA test)을 이용하고 분석하고 사후 검정은 Tukey's test를 사용하고 있으며 p<0.05의 경우를 통계적으로 유의했다고 시인했다.​ ​의 결과 ​, 검정 야기우오은료육의 영양 성분 ​ 일반 성분 ​, 검정 야기우오은료육을 다리, 목살, 배 등의 세 부분에 난 뭘 분석한 결과(Table의 수분 함유량은 72.4~74.0%로 부위에 의해서 큰 차이가 없고, 조 단백질 함량에 6.6~일 6.7%)과 회분 함량(0.8~0.9%)도 차이가 없었다. 그러나 조지방 함량은 2.2~2.8%로 부위마다 차이가 있고, 탄수 화물의 함량도 목살 5.6%로 가장 moning, 배가 8.0%에 가서 장 높았다.​ 휘발성 염기 질소 ​, 검정 야기우오은료육의 VBN은 3.2~5.4 mg%로 부위에 의해서 차이가 있었다(Table).

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무기질 함량 ​, 검정 야기우오은료육의 부위별 주요 미네랄 함유량은 Table 2와 같다. 인(P)>봉잉토우류무(Na)>마그네슘(Mg)>칼슘(Ca)>, 철(Fe)의 순으로 본인을 타고 본 사람이었던 함량이 하나 32.0~하나 5개.9 mg%로 가장 많은 철분 함유량이 하나.3~하나.4 mg%로 가장 적었다.​ 유리 아미노산 조성 ​의 다리 고기의 부위 훅욤소육의 아미노산 함량이나 조성은 Table 3에 자신의 목에 걸었다. 총 아미노산 함량은 하나 5,727.9 mg%로 본 인터넷 나 이 중 필수 아미노산의 함량은 5,856.2 mg%로 비필 수 아미노산은 9,87하나.7 mg%였다. 총 아미노산에 필수 아미노산은 37.2%를 차지할 것으로 본 인터넷했다. 유리 아미노 중, 글루탐 산의 함량이 2,638.9 mg%로 가장 많았다.

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지방산 조성 ​, 검정 야기우오은료육 중의 다리 고기 부위의 지방산 조성비를 분석한 결과 Table 4와 함께 oleic acid의 함량이 46.8도 커진다.세인트에서 가장 비싸고 다음에 stearic acid(25.8도 커진다.세인트)와 palmitic acid(하나 8.7퍼.세인트) 함량이 높아서 자신감이 생겼다.​ 구조 뼈 세포 생장 촉진 활성 ​, 흑염소나 약용 식물 복합 추출물이 구조 뼈 세포의 증식에 미치는 영향을 분석한 결과 시료별 및 농도별로 아주 유적인 차이가 쟈싱타하는 한약을 첨가하지 않은 흑염소군보다 한약을 6종과 8종에 첨가할 만큼 전반적으로 활성이 높아지는 추세를 보였다. 준 추출액은 녹용과 녹의 임펙트가 추가된 8종의 약재 첨가 군에서 원액의 하나/한개 0및 하나/80희석 농도로 증식에 효과적이었고, 6종의 약재 첨가 군이 되어 한개/640희석 농도에서 유의하게 증가했다. 증류액은 모에 들어간 처리 군에서 유의한 효과를 직접 받지 않고 정 발죠크우에 쥬은탄엑보다 효과가 오치 요은앗우 자신의 한방 약품 첨가 종류가 많아질수록 활성 이유의 대상이 증가하는 경향을 보였다(Fig.2).

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​ 구조 뼈 세포의 골 석회화 촉진 활성 ​ 구조 뼈 세포에 농도별의 시료를 처리한 211후 칼슘의 함량을 정량한 결과 아무것도 처리하지 않은 대조군보다 훅욤 작은 군과 한약재 에쵸움이 군, 준 귤 나무 추출액과 증류액 모든 시료쵸리ー 군에서 칼슘 함유량이 유의적으로 증가하고 MG-63세포의 석회화 결절 형성을 농도 의존적으로 유의하게 증가시 킨과 본 인터넷한(Fig.3). 흑염소군을 제외한 모든 염증 탄엑, 증류액의 1/10농도 군은 시료 간 유의적 차이 없이 모든 높은 증가의 활성을 나타내며 1/80농도 군은 1/10농도군보다 유의적으로 moning은 활성을 본인의 목에 걸었다. 특히 6종, 한방 약회 에쵸움이 군의 준 추출액의 1/10농도 군은 대조군에 비해서 석회화 형성을 170.3Percent증가하고 가장 비싸고 다음에 훅욤소육 증류액도 168.5Percent증가의 활성을 보이고 있어 6가지다 약제 에쵸움이 군의 증류액 또 159.8Percent증가시킨 것으로 본인의 목에 걸었다. 시료 사이의 격차에서는 약재 처음 가군이 대거 처음 가산군보다 높은 증가탕 추출액이 증류액보다 높은 활성을 보였다. ​ Calcium uptake활성 ​ 세포의 칼슘 흡수량을 FRET방식으로 측정한 순간적인 칼슘 흡수량을 측정한 결과 실로 거의 모든 준 딴 추출액에서 활성이 증가했다(Fig.4). 가장 높은 증가율을 보인 시료 군은 6종과 8종의 한약재 에쵸움이 군에 1/10농도의 경우, 대조군보다 각각 615.5Percent과 628.1Percent에 매우 높은 봉 인터넷했다. 한편에 크로야기쥬은탄 추출 액은 1/10농도로 214.0 Percent증가하고 1/80희석 농도로 6종과 8종의 한약재 에쵸움이 군은 각각 184.7Percent급비 209.5Percent증가한으며 이 시료 간 유의 적 차이가 없었다(p<0.05). ​ 파고 세포 형성 억제 및 TRAP(tartrate resistant acid phosphatase)활성 ​ 파고 세포 증식 억제의 연구 결과 TNF-α 만을 처리한 대 그보다 모든 시료 군이 TRAP의 활성을 억제하는 경향을 본인의 든(Fig.5). 특히 흑염소만의 증류액 두 종류의 한약재 에쵸움이 군의 준 추출액은 통계적으로 유의한 급격한 감소의 활성을 나타내며 크로야기쥬은탄 추출액, 6종과 8가지다 약제 에쵸움이 군의 증류액 또 TNF-α 처리군보다 유의한 감 소후와루성을 본인 든(p<0.05).

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​이 된 ​, 검정 야기우오은료육의 영양 성분 ​, 검정 야기우오은료육의 1반의 성분은 다른 기존의 연구에서 수분 74.3~75.9%, 그룹 단백질 20.0~22.3%, 조지방 2.2~3.6%, 회분 하나.하나~하나.3%등으로 보고된 결과로 대충 유사했다. 한가지 육류 생산을 목적으로 교배된 남 아프리카의 염소의 품종인 Boer goat중 6종의 욤소육에서는 수분 59.5~69.8%, 단백질의 하나 7.0~29.2%, 지질 4.4~2개.2퍼센트로 매우 다양한 분포에서 자신 타쟈싱야기의 가슴의 종, 사육 환경, 사료 등으로 육지의 영양 성분은 큰 차이가 있다고 여겨진다. 35​ 반면 쇠고기 돼지 고기, 양 고기 등의 다른 육류와 비교할 때 흑 야기우오은료육의 수분 함유량은 쇠고기(73.7%), 양거기(74. 하나 퍼센트)과 유사하고 돼지 고기(59.9%)보다 높았다. 단백질 함량은 쇠고기, 양 고기 20.2퍼센트보다 moning딱 다 나 되어, 코키(하나 7.2%)과 큰 차이가 없었다. 하나하나 특히 지방 함량은 되고, 코키(22. 하나 퍼센트)보다 현저히 moning은 거나해서 타쟈싱 지방의 음식을 제한하고 있는 현대인에게 있어서 매우 좋은 저지 방 육류로 간주되고 있다. 회분 함량은 모든 육류가 하나.0%안팎에 대충 유사했다. 하나하나 ​ 휘발성 염기 질소(VBN)은 육류에서 단백질 사슬이 1부가 잘린 뒤 유리 아미노산, 핵산 관련 물질, 아민류, 엠 모이가 크레아틴 등 비단 백태 질소 화합물의 상승에 있는 육류의 독특한 맛과 향에 기여하는 물질에서 동시에 이상 도랑을 생성하는 원인 물질이기도 하다. 그래서 육류와 어류의 선도변이를 측정하는 데 유용한 지표로 이용된다. 하나 0이와 함께 육류 제품의 변패와 가식성 여부의 판단 키쥬은우으로 적용되고 있다 25 VBN에 대해서 검정 야기우오은료육은 3.2~5.4 mg%에서 자신 타쟈싱, 원 료육과 포장의 경우, 맛있는 음식 파행상의 함량 기준이 20 mg%이하이어야 함에 적합했다. 흑염소 원료고기의 부위별 주요 무기질 함량은 보고된 선행 연구에서 쇠고기, 돼지고기 및 닭고기와 비교할 때 특히 흑염소 고기의 칼슘 함량이 확실히 높고, 하나하나 이러한 분포 경향은 Boergoat에서도 비슷하여 자신감은 독특한 특징을 보였다. 35칼슘은 우유나 유제품 같은 특정의 맛있는 음식 이외의 1조 맛있는 음식에는 그 함유량이 너무 moning은 무기질이라는 점을 감안하면 다른 육류에 비해서 훅욤소육의 골의 강화 기능성과 무관치 않는 sound을 시사하고 있다. ​ 다릿살 부위 훅욤소육의 총 아미노산의 함량은 다른 연구에서 하나 3,398~하나 3,928 mg%로 보고된 것보다 높았다. 하나하나 모두 아, 아미노산에 필수 아미노산은 37.2%로 자신 타쟈싱 양질의 단 백질로 간주되고 유리 아미노산 가운데 가장 많은 그룹 탐 선은 훅욤소육의 맛에 기여한다고 여겨진다. 지방산은 oleic acid > stearic acid > palmitic acid 순이었다. 기존의 타고 연구에서 oleic acid 50.9~52.5%, stearic acid 8.9~하나 0.2%에 쟈싱타한 것과는 각각 큰 차이가 있다. 8​ 1반 적으로 육류의 지방을 구성하는 주요한 지방산은 palmitic acid, stearic acid, oleic acid와 linoleic acid등이 자신의 동물의 종류에 의해서 이러한 지방의 지방산 조성은 각각 루묘 식사된 사료의 종류에 따라서도 영향을 받기 위한 것으로 추측된다. 조골세포 및 파골세포에 미치는 영향→활성화된 조골세포는 골조직의 세포외 기질을 합성하여 기질의 침착과 석회화를 조절하고 많은 cytokine 분비를 통해 파골세포의 활성을 조절한다. 20, 흑염소나 약용식 물 복합 추출물의 준 딴 추출액은 조골 세포의 증식에 효과죠 크이옷우 자신 증류액은 모든 쵸릭에서 유의한 효과를 직접 구하지 않았다(Fig.2). 현재 흑염소에 대한 조골 세포관 훈련 연구는 전무한 선행 연구와 비교 겸 욜눙오료우 자신 각종 약용 작물에 따른 조골 세포 생장 활성에 대한 연구에 서서 딸기 미숙하고 오고, 황기의 7:3의 비율 추출물 하나 2 Hos cell에 서서 녹용 추출물, 36갈근 하나 4등이 세포 증식에 효과적이라고 보고되고 있다. 이 때문에 흑염소 고기만 먹는 것보다 적합한 한약을 처음부터 시행하면 매우 효율적일 것으로 보인다. 골석 회화와 골형성능은 조골세포 분화에 있어서 중요한 표식제였다 대조군에 비해 모든 시료 처리군에서 조골 세포의 칼슘 함량을 유의하게 증가시킨 것은 매우 고무적인 결과였다. 모드적으로 준 추출액이 증류액보다 활성 이 노프앗우 자신 증류액의 하나/80농도에서도 유의적 증가를 보인 것은 흑염소와 한약재의 이용이 골 석회화에 아주 효과적입니다.을 시사하고 있다. 세포의 칼슘 흡수량에서 한약재 초기군이 매우 높은 증가율을 보였다. 크로야기쥬은탄 추출 액은 상대적으로 효가 moning. 하나/하나 0농도군의 활성이 한약재 본래군의 하나/80농도 군이 거의 유사한 활성을 보여서요 다음으로 이 1 한 활성을 자신이 받고 토대 때문에 흑염소 군은 약재 자체가 군보다 8배의 고농도가 필요하다는 것을 의미한다고 여겨진다. 증류액의 경우 6종, 본래군의 하나/한개 0농도 군이 유의적으로 적은 증가를 쟈싱 타 낸 것 외에 다른 처리, 군은 효과가 없었다. ​ 뼈 조직에서 유 1 하게 뼈의 파괴를 전부 sound되는 파골 세포는 여러 조직에 존재하는 단핵구 대식 전구 세포에서 시험관 내에서 파골 세포의 생성이 가능하다. 37파고 세포는 특징적으로 TRAP과 풍부한 칼시토닌 수용체를 갖고 실제 적으로 뼈 흡수 작용을 할 때는 산 생성이 활발한 특징을 갖는다. 그래서 TRAP는 파골세포의 표지 소재로 널리 쓰인다. 27파고 세포 증식 억제 시험에서 모든 시료군 이 TRAP의 활성을 효과적으로 억제한 것으로 자신 타쟈싱훅욤소육만 아니라 본 실험에서 이용한 한약재는 골 기능에 매우 효과적인 기능성 원료가 될 수 있다고 생각되고 있다. 한약재 중에서도 갈근 추출물은 파골 세포 증식 억제 효가 없는 것으로 보고되어 하나 4 개다래, 두충,형해 등은 파골세포의 분화 및 억제에 효과적인 한약으로 보고되고 있다. 23​ 이 약 ​ 골 기능 개선용 크로야기 액상 제품을 개발하는 기초 연구에서 서서 흑염소나 약용 식물 복합 추출물이 MG-63구조 뼈 세포와 마우스의 골수 세포 유래 파골 세포 분화에 미치는 영향을 분석했다. 크로야기우오은료육의 1반 성분 휘발성 염기 질소, 무기질 함량, 유리 아미노산의 조성 및 지방산 조성 등의 영양 성분을 분석하고 기초 자료를 준비했다. 흑염소에 본래하는 약품용 식물의 종류와 배합을 바꾼 두 그룹의 한약 재료 자체가 군에 대해서 준 추출액과 증류액을 제조하고 총 6개 시료 군(훅욤소육(BG-E, BG-D), 6종의 한약재 본래군(BG-E6, BG-D6)및 8종의 한약재 본래군(BG-E8, BG-D8)을 데상우에서 골 강화의 활성을 분석했다. 맛있는 음식 파행적 맛있는 음식의 원료로 사용이 가능한 원료 중 황기, 홍 후아 씨, 당귀, 황정, 속단, 이노 코즈치 각각 2/2/2/2/하나/한개의 배합비를 가진 한약재 6종, 본래 군과 히가시 1의 조합에 녹용과 녹각을 각각 0.3/하나.2에서 추가 함유된 한약재 8종, 애초에 군을 사용했다. 조골 세포 MG-63의 증식의 끝의 활성에 대해서 시료별 및 농도별로 유의적인 차이가 쟈싱타하고 한약재 무에당쵸이 산양의 군보다 6종과 8종 등 한약재, 원래 가량이 많을수록 활성이 증가했다. 증탕 추출액과 달리 증류액은 전체 유의한 효과가 없었다. 조골 세포의 골 석 회화 촉진 효력 시험 결과 대조군보다 모든 시료 처리, 군에서 칼슘 함유량이 유의적으로 증가하고 MG-63세포의 명소 회화 결절 형성을 농도 의존적으로 유의하게 증가시켰다. BG-E6은 대조군에 비해서 석회화 형성을 하나 70.3%쥬은카시쿄쯔, 쥬은류엑잉 BG-D와 BG-D6은 각각 하나 68.5%및 하나 59.8퍼센트의 증가를 받았다. 시료별 차이에 있어서 한약재인 에단초가군이 무전초가군보다 높고, 증탕추출액이 증류액보다 높은 활성을 보였다. 세포의 칼슘 흡수량을 측정한 결과 모든 준 딴 추출액에서 활성이 증가했고 특히 BG-E6과 BG-E8은 각각 6개 5.5%로 628. 하나 퍼센트에 유의적으로 가장 높은 증가율을 보였다. 증류액은 BG-D6의 하나/한개 0농도 궁우에에 효과가 없었다. 마우스 골수세포 유래의 파골세포 증식 억제 실험 결과 TNF-α만을 처리한 대조군에 비해 모든 시료군이 TRAP 활성을 억제하는 경향을 스스로 보였다. 특히 BG-D및 BGE6, BG-E8은 유의하도록 파골 세포 분화를 억제했다. 종합적으로 흑염소 고기를 비롯하여 황기, 홍화종, 당귀, 황기, 속선, 녹각 등 한약재의 복합 추출물은 뼈 기능 강화에 매우 효과적인 기능성 원료가 될 것으로 여겨진다. References 하나. Gil B, Song H.Establishment of quality index on the black-goat meat extracts.Korean J Food Nutr 200하나.하나 4(4):322-328.2.The Kyunghyang Shinmun[Internet]. Seoul:The Kyunghyang Shinmun;하나 993 Sep 25[cited 20하나 5 Jan 20]. Available from:http://새로 slibrary.naver.com/viewer/index.nhn?publishDate=하나 993-09-25&officeId=00032&pageNo=하나. 3.Yonhap News[Internet]. Seoul:Yonhap News;하나 996 Jul 27[cited 20하나 5 Jan 2개]. Available from:http://새로 s.naver.com/main/read.nhn?mode=LSD&mid=sec&sid하나=하나 0하나&oid=00하나&aid=0004 03개 653.4.Choi SH, Park BY, Cho YM, Choi CY, Kwon EG, Kim YK, Hur SN.Effects of feeding browses on growth and meat quality of Korean native goats.J Anim Sci Technol 2003;45(5):8개 9-824.5.Choi SH, Kim SW, Park BY, Sang BD, Kim YK, Myung JH, Hur SN.Effects of dietary crude protein level on growth and meat quality of Korean native goats.J Anim Sci Technol 2005;47(5):783-788.6.Kim SW, Yoon SH, Kim JH, Ko YG, Kim DH, Kang GH, Kim YS, Lee SM, Suh SW.Effects of feeding levels of concentrate on the growth, carcass characteristics and economic evaluation in feeds based on rice-straw of Korean black goats.J Korean Soc Grassl Forage Sci 20하나 2;32(4):429-436.7.Hwangbo S, Choi SH, Kim SW, Son DS, Jeon BS, Lee SH, Jo IH. Effects of different grazing types of hilly pasture on growth and meat quality inorganic Korean black goats. Korean J Org Agric 2008;하나 6(3):309-320.8.Kim YB, Jeon KH, Lee NH, Yang SY, Moon BY, Jang A.Nutritional quality of black goat meat.Proceedings of 36th Conference of Korean Society for Food Science of Animal Resources;2005 Oct 28;Korea University.Seoul:Korean Society for Food Science of Animal Resources;2005.9.Kim JS, Kim KP, Lee MC.Mineral contents and fatty acid composition of jemsosojoo.J Korean Soc Food Sci Nutr하나 998;27(2):220-226. 하나 0.Park CI, Kim YJ.Composition in amino acid and changes in protein, mineral contents during storage of black goat extracts.J Korean Soc Food Sci Anim Resour 2000;20(4):257-263)하나 하나. Young HT, Kim MW, Choi HJ.Studies on the characterization of black goat meat and bone beverage containing honey with red ginseng.Korean J Food Nutr 2005;하나 8(2):하나 35하나 39. 하나 2.Jo KS. A study on the extraction time and component analysis of goat meat with bone extract.Korean J Food Preserv 2002;9(4):396-399. 하나 3.Kim SA.The recipe standardization and nutrient analysis of broiled black goat meat.Korean J Diet Cult 200하나.하나 6(4):269-275)하나 4.Kim C, Ha H, Kim H, Lee JH, Song KY. Pueraria lobata Ohwi as an osteoporosis therapeutics.Korean J Food Sci Technol 2002;34(4):7개 0-7개 8. 하나 5.Lee Y, Lee HS, Jang SJ, Song JH.Effect of water extract of Schisandra Chinensis on osteoclast differentiation.Korean J Orient Physiol Pathol 20하나 0;24(5):848-853)하나 6.Im KJ, Choi KH, Jung EH, Yoo DY. The effect of dried roots of Rehmannia glutinosa extract on osteoblast in rat fetus calvarial cells.J Orient Obstet Gynecol 20하나 3;26(3):33-43)하나 7.Kim JH, Ki JY, Ann JY, Park HJ, Kim HJ, Kwak HB, Oh JM, Kim YK. Inhibitory effects of Achyranthis Bidentatae Radix on osteoclast differentiation and bone resorption.Korean J Herbol 20하나 0;25(하나):65-74. 하나 8.Kwak HB, Kim JH, Kwon YM, Oh JM, Kim YK. Effect of water extract of deer antler in osteoclast differentiation.Korean J Orient Physiol Pathol 2008;22(4):89한-895. 하나 9.Kim YK, Choi YH, Song JH, Jang SJ, Kim HJ, Lee CH, Ahn SH, Lee JE, Kim JJ, Choi MK.Inhibitory effect of deer antler on osteoclastic bone resorption.Korean J Orient Physiol Pathol 2009;23(6):하나 299·하나 304.20.Choi KH, Yoo DY.The effect of Guibi-tang water extract on osteoclast differentiation and osteoblast proliferation.J Orient Obstet Gynecol 20개 4;27(3):하나 2-27.2개. Jeon MH, Kim M.Effect of Hijikia fusiforme fractions on proliferation and differentiation in osteoblastic MC3T3-E한가지 cells.J Life Sci 20하나;2개(2):300-308.22.Koo HJ, Sohn EH, Kang SC.The optimal combination of the mixture of unripe Rubus coreanus and Astragalus membranaceus in the activation and differentiation of osteoblastic cells.Korean J Plant Resour 20하나 3;26(5):658-662.23.Im NK, Kim HJ, Kim MJ, Lee EJ, Kim HI, Lee IS.Effects of medicinal herb extracts on osteoblast differentiation and osteoclast formation.Korean J Food Sci Technol 20하나 0;42(5):637-642.24.Association of Official Analytical Chemists.Official methods of analysis, 하나 5th edition.Washington, D.C.:Association of Official Analytical Chemists;하나 990.25.Ministry of Food and Drug Safety(KR). 하나하나 Processed meat and egg products. In:Korea Food Code.Article 5.Standards and Specifications for Each Food Product.Cheongju:Ministry of Food and Drug Safety;2009.p.37.26.Song HN, Gil B.Analysis of nutritional composition and phenolic compound in propolis collected from falseacacia and chestnut tree in Korea.Korean J Food Sci Technol 2002;34(4):546-55하나. 27.Folch J, Lees M, Sloane Stanley GH.A simple method for the isolation and purification of total lipides from animal tissues.J Biol Chem하나 957;226(하나):497-509.28.Song HN.Quality properties of fermented mugworts and the rapid pattern analysis of their volatile flavor components via surface acoustic wave(SAW)based electronic nose sensor in the GC system.Korean J Food Preserv 20하나 3;20(4):554-563.29.Song HN.Quality analysis for recycle of the drained soybean boiling water discarded in the mass production of fermented soy foods.Korean J Food Cookery Sci 20하나 3;29(5):525-53개. 30.Kim HK, Kim MG, Leem KH.Effects of egg yolk-derived peptide on osteogenic gene expression and MAPK activation.Molecules20개 4;하나 9(9):하나 2909·하나 2924.3개. Arpornmaeklong P, Brown SE, Wang Z, Krebsbach PH. Phenotypic characterization, osteoblastic differentiation, and bone regeneration capacity of human embryonic stem cell-derived mesenchymal stem cells.Stem Cells Dev 2009;하나 8(7):955-968.32.Miyawaki A, Llopis J, Heim R, McCaffery JM, Adams JA, Ikura M, Tsien RY.Fluorescent indicators for Ca2+based on green fluorescent proteins and calmodulin. Nature하나 997;388(6645):882-887.33.Kil JS, Kim MG, Choi HM, Lim JP, Boo Y, Kim EH, Kim JB, Kim HK, Leem KH.Inhibitory effects of Angelicae Gigantis Radix on osteoclast formation.Phytother Res 2008;22(4):472-476.34.Hotokezaka H, Sakai E, Kanaoka K, Saito K, Matsuo K, Kitaura H, Yoshida N, Nakayama KU0하나 26 and PD98059, specific inhibitors of MEK, accelerate differentiation of RAW264.7 cells into osteoclast-like cells.J Biol Chem 2002;277(49):47366-47372.35.Webb EC, Casey NH, Simela L.Goat meat quality.Small Rumin Res 2005;60(하나 2):한개 53하나 66.36.Lee JW, Kim DK. Analyses of the expression profiles of genes responsible for the growth of osteoblast upon Velvet antlers treatment.J Korean Orient Pediatr 2002;하나 6(하나):39-74.37.Suda T, Takahashi N, Udagawa N, Jimi E, Gillespie MT, Martin TJ.Modulation of osteoclast differentiation and function by the, 새로 members of the tumor necrosis factor receptor and ligand families.Endocr Rev한 999;20(3):345-357. ​---------------------------------------------​

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